一、簡介
 

　　elisa酶聯免疫試劑盒是酶免疫測定技術中應用很廣的技術。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體(聚苯乙烯微量反應板)表面，使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除。
 

　　二、成分
 

　　試劑盒內包括以下試劑：
 

　　1.酶標板(96孔板)
 

　　2.血清檢測抗體試劑(固定在小板上)
 

　　3.特異性標記兔抗人IgG辣根過氧化物酶(HRP)
 

　　4.HRP底物染色液
 

　　5.固定酶標板的NaCI-Pi緩沖液
 

　　6.去污液
 

　　7.色譜純洗板緩沖液
 

　　三、樣本類型
 

　　本試劑盒可檢測不同種類的生物樣本，包括：血清、血漿、組織抽提物、陽性參考樣本、陰性對照樣本等。不過首先要保證樣本與試劑之間無相互干擾。
 

　　四、儲藏
 

　　應于2-8℃的陰涼干燥處存放。如需長期貯存，應冷凍保存(-20℃或-80℃)。
 

　　五、試劑準備
 

　　1.酶標板制備：首先，在每個空白小孔板的每個孔中，添加50μL的PBS(0.01M)。然后將板放入一個旋轉式混合器中，溫和混合，管孔覆蓋在對應的坑孔區域上，將坑孔以180度反轉，然后在抽走液體后，再次將坑孔埋入緩沖液中，丟棄PBS。最后，將板于坑孔中添加100µl的固定抗體，每個備件(坑孔)盡可能多添加固定抗體。
 

　　2.樣品制備：將樣品與樣品稀釋液按照比例混合。
 

　　3.銷量質控制備：將陽性參考樣本與陰性對照樣本準備好。
 

　　六、操作步驟
 

　　1.將酶標板每個小孔內填充50µL固定酶標記性抗體時，將板制備至2-8℃下存儲20小時。
 

　　2.將液態樣品溶于樣品稀釋液中，使樣品達到適合檢測的濃度。樣品應避免過度稀釋或過度濃縮。
 

　　3.然后，向每個小孔中加入50µl的稀釋后的樣品，以及50µl的陽性參考樣本、50µl的陰性對照樣本。
 

　　4.使用封板膜密封，并在37℃恒溫箱中孵化60分鐘。
 

　　5.丟棄所有的液體，并在試劑盒內水龍頭下沖洗各個小孔以清除未被綁定的物質。
 

　　6.將200υl洗板緩沖液加入每個小孔中，用廢液槽放置一段時間后，倒掉，重復此操作至少3次。
 

　　7.向每個小孔中加入50µl的HRP標記羊抗人IgG，孵化37℃下30分鐘。
 

　　8.重復步驟6以清除未結合的物質。
 

　　9.將50µl的HRP底物添加到每個小孔，并在黑暗中置于室溫靜止15分鐘。
 

　　10.停止反應，加入50µl停止液應用于每個孔中。
 

　　11.讀取OD值測量各小孔校準曲線，計算樣本的質量濃度。
 

　　七、規范化操作流程與關鍵質控點
 

　　遵循規范化流程并嚴控關鍵節點，是獲得CV(變異系數)合格、可靠數據的保障。
 

　　A. 實驗前準備與試劑平衡
 

　　試劑回溫：將所有試劑盒組分從4℃取出，在室溫(20-25℃)下放置至少30分鐘，以達到溫度平衡。這能有效減少因溫度差異導致的孔間變異。
 

　　洗滌液配制：若提供濃縮洗滌液，需用去離子水或蒸餾水按說明書比例精確稀釋，并充分混勻。渾濁或未全部溶解的洗滌液會堵塞洗板機。
 

　　B. 加樣與孵育關鍵
 

　　加樣技巧：使用校準過的移液器，槍頭垂直插入孔底(避免觸碰底部包被物)，緩慢加入樣品或試劑，避免產生氣泡。建議對標準品和樣品進行復孔檢測。
 

　　孵育條件：嚴格按說明書控制溫度(通常是37℃)和時間。孵育時，必須使用封板膜密封，防止液體蒸發和孔間交叉污染。避免孔板疊放過高導致受熱不均。
 

　　C. 洗滌——最易被忽視的成敗關鍵
 

　　洗滌要點：洗滌是去除未結合物質、降低背景信號的核心。若用洗板機，應定期校準吸液、注液量；若手工洗板，需注意：
 

　　棄液后，將板在干凈吸水紙上拍干，以去除殘留液。
 

　　每孔加滿洗滌液，靜置30-60秒后再棄去，重復規定次數(通常3-5次)。
 

　　最后一次洗滌后，務必將孔內液體拍干，但不可讓孔壁干燥過久。
 

　　D. 顯色與終止
 

　　顯色(避光)：加入底物液后，需在避光條件下孵育。顯色時間需嚴格控制，可觀察陽性孔顏色變化(通常為藍色)來決定終止時機，避免顯色過度導致“高鉤”效應。
 

　　終止與讀數：加入終止液(通常為稀硫酸)后，顏色由藍變黃，應在30分鐘內于相應波長(如450nm，并參考630nm作為參比波長)讀取OD值。讀取前，用無塵紙擦干板底部的冷凝水或污跡。
 

　　八、禁忌事項
 

　　1、本檢測盒內禁止使用過期試劑。
 

　　2、禁止本試劑盒內的試劑與其他試劑或活性物質混合使用。
 

　　3、禁止口服或其他接觸本試劑盒內的試劑。如發生皮膚敏感現象或可能影響人體內部健康，應進行醫學干預。
 

　　九、適用范圍
 

　　本檢驗盒被廣泛運用于檢測各類疾病，如傳染病、自身免疫性疾病，腫瘤標志物、突變基因等。
 

　　十、質控
 

　　在正常操作中，該檢測盒可保證準確性和可重復性。如果使用中發現問題，請先嘗試實驗操作流程，如仍然無法解決，可向生產廠家進行垂詢。
 

　　以上就是對Elisa酶聯免疫試劑盒的說明書，希望各位用戶在使用本試劑盒時一定要加倍謹慎，按照說明書操作，以確保檢測結果準確無誤。