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產(chǎn)品名稱:

登革熱病毒3型(DFV-III)熒光PCR檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品型號(hào): 產(chǎn)品時(shí)間: 2023-03-08
登革熱病毒3型(DFV-III)熒光PCR檢測(cè)試劑盒適用于檢測(cè)的疑似感染病人的靜脈血等標(biāo)本中登革熱病毒 3 型 RNA,適用于登革熱病毒 3 型感染的輔助診斷。其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。
本試劑盒用一對(duì)登革熱病毒 3 型特異性引物,結(jié)合一條特異性熒光探針,用一步法熒光 RT-PCR 技術(shù)對(duì)登革熱病毒 3 型 RNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè),用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

產(chǎn)品概述

登革熱病毒3型(DFV-III)熒光PCR檢測(cè)試劑盒說明書

【產(chǎn)品名稱】

商品名稱:登革熱病毒 3 型(DFV-III)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR 熒光探針法)

Name :Diagnostic Kit for Dengue Virus type 3 RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)

【包裝規(guī)格】48 份/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測(cè)的疑似感染病人的靜脈血等標(biāo)本中登革熱病毒 3 型 RNA,

適用于登革熱病毒 3 型感染的輔助診斷。其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒用一對(duì)登革熱病毒 3 型特異性引物,結(jié)合一條特異性熒光探針,用一

步法熒光 RT-PCR 技術(shù)對(duì)登革熱病毒 3 型 RNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè),用于臨床上對(duì)

可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

名 稱 規(guī) 格

酶液 50μl×1 管

DFV-III 反應(yīng)液 1.0ml×1 管

DFV-III 陽性質(zhì)控品 50μl ×1 管

陰性質(zhì)控品 250μl ×1 管

說明:不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融少于 5 次,

有效期 12 個(gè)月。

【適用儀器】

ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ

Opticon2 等其他熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。

【標(biāo)本采集】

疑似感染病人的靜脈血 2mL 至 EDTA-2Na 抗凝管。

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長(zhǎng)期保存可置-70℃,但不能超過 6 個(gè)月,標(biāo)

本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1樣本前處理

2000rpm 離心 5min,吸取上層血清轉(zhuǎn)入 1.5mL 滅菌離心管中。

1.2RNA 提取

推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 RNA 提取試劑盒(離心柱提取

法),請(qǐng)按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性

對(duì)照+1 管陽性對(duì)照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:

試劑 DFV-III 反應(yīng)液 酶液

用量 20μl 1μl

3. 加樣(樣本處理區(qū))

將步驟 1 提取的 RNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μl,分別加入相應(yīng)的反

應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

4. PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))

4.1將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);

4.2設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul;熒光通道選擇:

檢測(cè)通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,請(qǐng)勿

選擇 ROX 參比熒光。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:

步驟 循環(huán)數(shù) 溫度 時(shí)間 收集熒光信號(hào)

1 1cycle 42℃ 20min 否

2 1 cycle 95℃ 10min 否

3 40 cycle

94℃ 15sec 否

55℃ 30sec 是

5. 結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲

線出現(xiàn)整體傾斜時(shí),根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15

范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的 Value

值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照),重新分析結(jié)果。

5.2結(jié)果判斷

陽性:檢測(cè)通道 Ct 值≤35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線;

可疑:檢測(cè)通道 35.0<Ct 值≤37,建議重復(fù)檢測(cè),如果檢測(cè)通道仍為 35.0<Ct

值≤37,且曲線有明顯的增長(zhǎng)曲線,判定為陽性,否則為陰性;

陰性:樣本檢測(cè)結(jié)果 Ct 值>37 或無 Ct 值。

6. 檢測(cè)方法的局限性

Ø 樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);

Ø 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果;

Ø 陽性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果;

Ø 病原體在流行過程中基因突變、重組,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

Ø 不同的提取方法存在提取效率差異,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

Ø 試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,出現(xiàn)假陰性或

定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果;

Ø 本檢測(cè)結(jié)果僅供參考,如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。

7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品:無明顯擴(kuò)增曲線或無 Ct 值顯示;

陽性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期,且 Ct 值≤32;

以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

8. 產(chǎn)品性能指標(biāo)

陰陽性參考品符合率:5 份陽性參考品符合率為 100%;10 份陰性參考品符合率

為 100%。

低檢測(cè)限:5.0×102copies/ml。

精密度:批內(nèi)、批間精密度檢測(cè) Ct 值的變異系數(shù)(CV)均小于等于 3%。

【注意事項(xiàng)】

Ø 所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行;

Ø 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,*混勻并短暫離心;

Ø 反應(yīng)液應(yīng)避光保存;

Ø 反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

Ø 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)工作服;

Ø 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;

Ø 實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器;

Ø 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全

通則》進(jìn)行處理。

登革熱病毒3型(DFV-III)熒光PCR檢測(cè)試劑盒相關(guān)產(chǎn)品:

0511腦膜炎奈瑟菌A群(NM-A)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
0521腦膜炎奈瑟菌C群(NM-C)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
0531腦膜炎奈瑟菌W135群(NM-W135)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
0541腦膜炎奈瑟菌A/C群(NM-AC)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-雙色熒光探針法) 48T
0601水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
0701人博卡病毒核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
0801噬肺軍團(tuán)桿菌(LP)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
0901百日咳桿菌(BP)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
1001白喉?xiàng)U菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

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