柱式病毒DNA提取純化試劑盒是在一管式病毒 DNAOUT 的基礎(chǔ)上開發(fā)的、專門用于從血清(血 漿)等液體樣品及拭子（咽拭子、鼻拭子、口腔拭子、陰道拭子等）中提取微量病毒 DNA 的產(chǎn)品，它具有下列特點(diǎn)：

1. 操作簡單，整個(gè)過程只需要 20 分鐘左右，不需要額外在洗柱液中補(bǔ)加乙醇。

2. 靈敏度高，通過 PCR 檢測到的終靈敏度可以達(dá)到 30-50 拷貝/mL。

3. 安全無毒。

4. 如果加上病毒離心富集步驟，多可以處理 1.5 mL 液體病毒樣品。

5. 與 PCR 和熒光 PCR 兼容。

6. 價(jià)廉物美，性價(jià)比遠(yuǎn)高于國外同類產(chǎn)品。

7. 適用于各種材料，包括血清、血漿、腦脊液、尿液、糞便、培養(yǎng)細(xì)胞上清液等無 細(xì)胞材料。

常溫運(yùn)輸及保存，DNA 病毒裂解液長期（1 月以上）放置時(shí)需要放 4℃，有效期一年。

1. 如果有 N 個(gè)樣品，標(biāo)記 N+2 個(gè) 1.5-2 mL 螺旋蓋塑料離心管，多出的一個(gè)為陽性對照，一個(gè)為陰性對照。為避免污染， 建議不要使用壓蓋式塑料離心管。在每個(gè)管上做個(gè)標(biāo)記，以在后續(xù)操作時(shí)區(qū)別向 心面和離心面。然后在離心管中分別加入 0.2 mL 液體樣品（血清、血漿、尿液、 腦脊液、唾液、眼淚等等），陽性對照和陰性對照。

1.1、 如果是口腔拭子、咽喉拭子等各種拭子樣品，則將拭子放入 0.2mL 自備 生理鹽水中擠壓出液體，然后取 0.2mL 進(jìn)行提取。

1.2、 如果是糞便等半固定樣品，則取約 0.3mL 的樣品，加入 0.3mL 自備生 理鹽水，震蕩重懸，離心取 0.2mL 上清進(jìn)行提取。

1.3、 如果血液，細(xì)胞培養(yǎng)液等含細(xì)胞的液體，可以離心用上清，也可以直接取 用，但后者提取的病毒 DNA 中會有少量細(xì)胞的基因組 DNA 污染（但不 影響 PCR）。血漿的抗凝劑必須是 EDTA 或 ACD，不能是肝素。使用 ACD 時(shí)由于所加入 ACD 會增加體積，樣品會被稀釋，得到的病毒滴度 會比使用 EDTA 低 15%左右。血漿按 0.6mL/管的量分裝保存，以 避免反復(fù)凍融。

1.4、 如果樣品是實(shí)體組織或培養(yǎng)細(xì)胞，則需要在自備生理鹽水中勻漿后離心， 用 0.2mL 上清液（含病毒）進(jìn)行提取，但此種情況下后得到的病毒 DNA 不可避免的會含有少量基因組 DNA 污染（但不影響 PCR 檢測）。

1.5、 如果液體樣品中的病毒需要富集，可以使用 1.5 mL 上述方法得到的液體 在 4℃ 24,000 g 冷凍離心 60 分鐘, 移棄 1.3 mL、用剩下的 0.2mL 繼 續(xù)操作。

2. 加入 0.6 mL DNA 病毒裂解液到各離心管中，振蕩 30 秒混勻后室溫放置 10 分 鐘裂解病毒。注意：DNA 病毒裂解液在 4℃放置后可能會產(chǎn)生沉淀，使用前必須 放在 65℃水浴使沉淀*溶解并充分搖勻后再取用。

3. 加入 0.8mL 上柱結(jié)合液到離心管中，顛倒混勻后轉(zhuǎn)移一半的混合液（0.8mL） 到離心吸附柱中，室溫放置 2 分鐘。

4. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集 管中。

5. 將剩余的另外一半裂解液（0.8mL）轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，室溫放置 2 分鐘。

6. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集 管中。

7. 加入 0.7 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12,000 rmp 室溫離心 1 分鐘，棄收 集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。

8. 加入 0.3 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12,000 rmp 室溫離心 1 分鐘，棄收 集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。此為第二次洗滌，可以跳過。

9. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘（干甩），棄含穿透液的離心管。

10. 將干甩后的離心吸附柱套入到一個(gè)自備的 RNase-free 的 1.5 mL 離心管中，在 離心吸附柱的濾膜的中部加入 30-100 uL DNA 洗脫液 3.0，然后室溫放置 2 分 鐘。

11. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘，離心管中的溶液即為病毒 DNA 溶液。

12. DNA 樣品可以直接用于 PCR，也可放-20℃長期保存。 

柱式病毒DNA提取純化試劑盒